冻存过的细胞还能用吗？还能提蛋白吗？

胞养好了，但是没时间做后面的实验了，这时怎么办？将细胞收下来，直接冻在-80℃冰箱，是大多数人的常规操作。因为-80℃冰箱是大多数蛋白研究人员的安全感来源，但是把细胞冻存就保险了吗？在冻存过程中，细胞发生了哪些变化呢？冻存过的细胞还可以提总蛋白吗？可以做磷酸化研究吗？可以分离胞质胞核吗？可以分离细胞亚结构吗？冻存过程中，细胞发生了哪些变化？0℃至-60℃

细胞被冻存在-80℃冰箱后，随着温度的下降，在0℃到-60℃之间会形成大量冰晶，胞外的冰晶会导致细胞发生机械损伤，胞内的冰晶则会破坏细胞膜和细胞器，引起细胞死亡。细胞器被破坏，细胞器内的蛋白酶释放从而引起蛋白降解。

细胞冻融过程损伤机制

10℃至-16℃

当温度从10℃降温至-16℃的过程中，细胞处于过冷状态，冰晶自发形成，膜脂脱水从液相变为固相，膜渗透率改变，造成冷休克。冰晶损伤和冷休克都会对细胞成为致命杀手。复温过程中，胞内外冰晶容易发生再结晶形成更大的冰晶，高浓度的电解质也会导致溶质损伤，造成致命细胞伤害。复温时造成的细胞损伤非常快，往往在极短的时间内发生。

0℃至-196℃再至0℃

Nature子刊刊登的细胞样品从0℃到-196℃再到0℃，细胞变化过程。可见细胞在冷冻和解冻过程中，温度变化对细胞施加巨大压力，由此可能导致蛋白变性并影响高级结构，例如卵母细胞经过冻存后，微管和减数分裂纺锤体的结构可能发生变化，致使受精后染色体分离出现异常。

冻存的细胞样品还能用吗？还能提取蛋白做实验吗？总蛋白提取能做吗？

冻存的细胞可以用于总蛋白提取，但是某些蛋白可能在冻融过程中已经降解或高级结构发生改变，最终影响下游实验的检测。故做细胞凋亡检测或磷酸化蛋白检测，酶活性检测等实验，不建议使用冻存的细胞样品。推荐细胞收集后尽快进行蛋白提取，将蛋白样品冻存于-80℃。Invent柱式法蛋白提取工具（Cat#SD-001/SN-002），让来不及做蛋白提取成为历史，仅需在细胞样品中加入裂解液，过柱，1分钟即可完成变性蛋白提取。迅速完成蛋白提取，再不用为细胞冻存问题而烦恼