科研血清实验中常见问题及解答

科研血清是由血浆去除纤维蛋白原而形成的一种很复杂的混合物，其组成成份虽大部分已知，但还有一部分尚不清楚，且血清组成及含量常随供血动物的性别、年龄、生理条件和营养条件不同而异。景源实验技术介绍一下在科研血清实验中常见的一些问题。

1、如何贮存和冻结血清才不会使产品质量受损?

将血清从冷冻箱取出后，先置于2～8℃冰箱使之融解，然后在室温下使之全融。但有必要注意的是，融解过程中有必要规矩地摇晃均匀。长时刻贮存在2-8℃时，血清中的各种蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纤维蛋白原、玻粘连蛋白等)可能聚集而构成沉积或可见的混浊。因而，推荐在-20℃以下贮存血清，并防止反复冻融。主张血清应保存在-2O℃。若存放于4℃时，请勿超过一个月。若一次无法用完一瓶，主张无菌分装血清至恰当的灭菌容器内，再放回冷冻。

2、血清中包含絮状沉积，它们是什么，怎样处理?

这些沉积包含纤维蛋白和脂蛋白。这是正常特性，不会影响产品性质。要除掉沉积，离心血清(400g，1-2分钟)或许简单的让其沉积在瓶子底部，将血清小心地转移到另一个无菌瓶里(一般不主张选用过滤的办法除掉沉积，由于沉积会堵塞滤膜而无法过滤)。大多情况轻轻摇动沉积并加热至37℃就会再溶解。所以，运用产品时要摇动并加热血清至37℃，沉积会天然消失。

3、如何防止血清中发作沉积?

按如下操作可防止沉积的发作：

(1)冻结血清时，请随时将之摇晃均匀，使温度及成分均一，削减沉积的发作。

(2)血清分装冻存时，须规矩摇晃均匀(当心勿形成气泡)，使温度与成分均一。

(3)勿直接由-20℃直接至37℃冻结，因温度改变太大，简单形成蛋白质凝结而发作沉积。

(4)勿将血清置于37℃太久，否则血清会变得污浊，一起血清中许多较不稳定的成份也会因而受到破坏，从而影响血清的品质。

(5)若有必要做血清的热灭活，请遵守56℃，30分钟的原则，并且随时摇晃均匀。温度过高，时刻过久或摇晃不均匀，都会形成沉积物的增多。

在ELISA实验的过程中，血清培养是很重要的步骤，但是在这过程中也会出现一些的问题，比如说，在培养进程中会出现一个个“小黑点"的现象，这是怎样一回事呢？接下来就为大家解析一下这个现象出现的原因以及解决方法。

我们一旦发现培养基中有黑点，我们先不要着急，也不要慌张，要搞清楚这个黑点是什么?什么构成的?首先，要肉眼观察培养基是否混浊，然后，在镜下观察培养细胞生长的状况，黑点是否游动等。如果细胞被污染，微生物则会不断繁衍，培养基就会敏捷变黄、变混浊。污染包括细菌污染、支原体污染等。如果在镜下观察细胞，生长状况出色，与黑点出现前比较，没有任何改变，那么，黑点的出现或许与以下几种状况有关：

第一，细胞生长过老，黑点是破碎的细胞残骸

第二，血清质量欠好，重复冻融的效果

第三，制作培养基的pH值偏高，不宜细胞生长

第四，制作培养基的水质、容器不合格(可应用离心、过滤的方法去除这些黑点)

第五，培养的原代细胞中出现小黑点(或许是原代组织中的杂质，屡次传代能够消除)。

那么我们怎样防止黑点生成呢？一般要做到以下几点：

(1)尽可能减少血清冻融次数。

(2)培养基无需37℃水浴。

(3)培养基保持PH值7.0- 7.2。

(4)严格控制制作培养基的水质，容器定时冲刷。

(5)掌握细胞传代的机会，细胞切勿生长过老。