分散固相萃取-液相色谱-串联质谱法测定水果中19种酸性农药
酸性农药作为除草剂和植物生长调节剂，在农业生产中已广泛应用。特别是近年来，酸性农药作为植物生长调节剂及保鲜剂等在水果中的应用日益增多。根据GB 2760-2011 规定，2,4-滴可作为水果和蔬菜的防腐剂，最大使用量为0.01 g/kg。2,4-滴丙酸和二甲四氯丁酸用作苹果、柑橘等的落果抑制剂等也有报道。然而随着研究的逐步深入，有关酸性农药安全性的报道也逐渐增多。
有研究表明，2,4-滴是严重的眼睛刺激物( 毒性等级I)，可能与非霍奇金淋巴瘤的发生有关。1997 年世界野生动物基金会( WWF) 已将2,4-滴等酸性农药列入环境激素化合物名单。许多国家都针对这些农药制定了最高残留限量标准( MRLs) 。
目前，关于地表水、粮谷和茶叶等基质中酸性农药的多残留检测方法已有报道。颜鸿飞等[7]采用石墨化碳黑固相萃取净化，三甲基硅烷化重氮甲烷柱前衍生，建立了茶叶中29 种酸性除草剂的气相色谱-质谱( GC-MS) 法; 桂建业等建立了以五氟苄基溴为酯化衍生试剂的13 种酸性除草剂固相萃取衍生-气相色谱-质谱法。酸性农药极性大，沸点高，不能直接用气相色谱测定，需要进行柱前衍生，方法危险性高。
此外，酸性农药结构中多含有羟基、酚羟基、羧基等官能团，现有固相萃取前处理法步骤繁琐。而分散固相萃取法快速、稳定，目前采用分散固相萃取-液相色谱-串联质谱法测定水果中酸性农药尚未见报道。因此，本研究以水果为研究对象，采用分散固相萃取净化，研究了不同提取溶剂组成及分散固相萃取吸附剂对提取净化效果的影响，建立了C18分散固相萃取-反相液相色谱-串联质谱测定水果中19 种酸性农药的检测方法。本方法简便、快速，能够满足现有国际限量的要求。
2 实验部分
2.1 仪器与试剂
1200 型液相色谱仪( 美国Agilent 公司) ，API 5000 型串联四级杆质谱仪( 美国AB 公司) ，涡旋振荡混匀器( 中国其林贝尔公司) ，高速冷冻离心机( 美国Thermo 公司) ，N-Evaptm 111 型氮吹仪( 美国OA公司) ，Waters XTerra C18色谱柱( 150 mm × 2.1 mm，5.0 μm，美国Waters 公司) 。2,4-滴等19 种酸性农药标准物质( 纯度≥98.5%，德国Dr. Ehrenstofer 公司) 。甲醇、乙腈和乙酸铵( HPLC 纯，美国Fisher 公司) ，甲酸( HPLC 纯，美国DIMA 公司) ，水为MilliQ 超纯水。N-丙基乙二胺吸附剂( PSA) 、十八烷基键合硅胶吸附剂( C18 ) 和石墨化碳黑( GCB) ( 天津博纳艾杰尔公司) 。
2.2 实验方法
2.2.1 标准溶液的配制称取0.1 g( 精确至0.00001 g) 酸性农药标准物质，其中双草醚和喹禾灵用丙酮溶解并定容于50 mL 容量瓶中，制得2000 mg/L 标准储备液，其它农药以乙腈( 甲醇) 配制成2000 mg/L单标储备溶液; 混合标准储备溶液: 分别移取单标储备溶液250 μL，以乙腈定容至50 mL，配成10 mg/L混合标准储备溶液。使用前移取适量混合标准溶液，以初始流动相或空白样品提取液逐级稀释成工作液，现用现配。
2.2.2 样品前处理称取10.0 g( 精确至0.01 g) 水果样品于50 mL 塑料离心管中，加入10 mL 乙酸-乙腈( 1∶ 99，V/V) 提取剂，4 g 无水MgSO4 和1 g 无水醋酸钠，高速涡旋0.5 min 后，在4 ℃下，以10000 r/min离心5 min。静置片刻，吸取1 mL 离心上清液于10 mL 具塞塑料离心管中，加入50 mg C18 固相分散萃取净化剂，高速涡旋0.5 min 后，在4 ℃下，以10000 r/min 离心5 min。过0.22 μm 有机相滤膜，供HPLCMS/MS 分析。
2.2.3 色谱和质谱条件采用Waters XTerra C18色谱柱( 150 mm × 2.1 mm × 5.0 μm) ; 柱温: 40 ℃; 进样体积:5 μL。流动相A 为0.1%甲酸，流动相B 为0.1% 甲酸-乙腈溶液，流速为0.20 mL/min，梯度洗脱程序: 0 min，85% A; 0 ～ 20 min，85% ～ 5% A; 20 ～ 22 min，5% A; 22 ～ 22.5 min，5% ～ 85% A; 22.5 ～30 min，85% A。电喷雾离子源温度( TEM) : 500 $C; 雾化气压力( GS1) : 206.85 kPa; 气帘气压力( CUR) : 41.37 kPa;辅助气压力( GS2) : 344.75 kPa; 电喷雾电离正离子模式喷雾电压( IS+ ) : 5500 V; 电喷雾电离负离子模式喷雾电压( IS" ) : 4500 V。监测离子、碰撞电压( CE) 、去簇电压( DP) 、碰撞室入口电压( EP) 、碰撞室出口电压( CXP) 等参数见表。
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