肉及肉成品中新霉素残留检讨的高效液相色谱测定要领
(1)试剂和原料除非凡划定外，所用试剂均为说明纯
①乙腈
②甲醇：紫外光谱纯
③三乙胺
④磷酸(85％)
⑤氯化钠
⑥磷酸盐缓冲液
⑦殽杂提取液：磷酸盐缓冲液—乙腈(1 )。
⑧硼酸钾缓冲液：将2．5z硼酸溶于80mi水中，用50g／100ml氢氧化钾溶液调pH至lO．
5，用水定容至100ml。
⑨邻苯二甲醛试剂：将100mg邻苯二甲醛溶于Iml甲醇中，插手200ul2—琉基乙醇和10ml硼酸钾缓冲液，用棕色瓶(有盖)贮存于冰箱中，1周内有用。
⑩碱性缓冲液：将76e四硼酸钾溶于400mi水中，用50g／100ml氢氧化钾溶液调pH至11．0，用水定容至500mi。
⑾洗脱剂：碱性缓冲液—甲醇(1十4)。
⑿阳离子互换树脂；D152。
⒀硫酸新霉素尺度品：生化试剂
⒁硫酸新霉素尺度溶液：称取适量的硫酸新霉素尺度品(准确至0，lmg)，用水配成浓度为o．100rug／ml的尺度贮备溶液，按照必要再用水配成恰当浓度的尺度事变溶液。
⒂新霉素衍生物尺度溶液：将适量的尺度事变溶液注入到阳离子互换柱中，举办衍生化回响，制成新霉素衍生物尺度溶液，
(2)仪器和装备
①液相色谱仪：配有荧光检测器
②高速组织捣碎机
③振荡器
④离心机
⑤过滤漏斗；滤孔为80-120um、40—80／um
⑥阳离子互换柱：120mmX5mm(内径)玻璃柱。用碱性缓冲液将阳离子互换树脂制成悬浮液，均衡2h，装入玻璃柱中，高度约为6cra，用5ml洗脱剂淋洗，流速为0．8ml／min，然后用水洗至流出液呈中性，备用。
(3)测定步调
①提取称取试样约l0g(精确至0．1g)于一lOOml锥形瓶中，加人60ral殽杂提取液和2g氯化钠，振荡30min，经滤孔为80—120~m的过滤漏斗抽滤，残渣用3x10ml殽杂提取液洗涤。归并滤液和洗液于一250rnl烧杯中。在滚水中加热30min，取下，于3000r／min离心20min，置4℃冰箱中冷却20min，然后经滤孔为40～80bm的过滤漏斗抽滤，网络滤液。
②衍生化将滤液注入阳离子互换柱中，用lOml水洗柱，弃去流出液。将lml邻苯二甲醛试剂注入柱中，回响5rain。然后加2ml洗脱剂洗脱柱上衍生物。弃去前面iml洗脱液，网络后头lml洗脱液，当即安排在一18~0冰箱中，15min后举办液相色谱测定。
③测定
a.色谱前提
色谱柱：ODSHypersi
柱温：35~C：
活动相：77．5％甲醇水溶液中含0．09mol／L三乙胺和o．45moI／L磷酸
流速：1．0ml／Illin
引发波长：345nm
发射波长：445nm
进样量：10ul
b．测定按照样液中新霉素含量环境，选定峰面积临近的新霉素衍生物尺度溶液。尺度液和样液中新霉素衍生物相应值均应在仪器检测线性范畴内。对尺度液和样液等体积参插进样测定。在上述色谱前提下，新霉素衍生物的保存时刻约为6min。
④空缺试验除不加试样外，按上述测定步调举办。
(4)检测限和接纳率
本要领的测定低限为50ug／kg。
在0．05-0．50mg／kg添加浓度程度上的接纳率范畴为90.4%-96.3%
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