葡萄酒中甜蜜素的含量测定方法
甜蜜素(环己基氨基磺酸钠)是一种甜味剂，甜度是蔗糖的5O倍。目前，我国允许甜蜜素作为食品添加剂在多种食品中使用，在GB276001996《食品添加剂使用卫生标准》中对添加量作出明确的规定，葡萄酒中添加的最高限量为0.65s/kg。但有些生产厂家为了降低成本和改善口感，在葡萄酒中超量加入甜蜜素，损害了消费者的身体健康。食品中环已基氨基磺酸钠(甜蜜素)的测定标准是GB/TS009.97-2003 ，该标准规定了食品中环已基氨基磺酸钠的三种测定方法-气相色谱法、比色法、薄层层析法，其中气相色谱法采用填充柱。
本研究利用毛细管气相色谱法测定葡萄酒中的甜蜜素，并对葡萄酒中甜蜜素提取方法作了改进，采取直接离心而无需将存在于正己烷中的环己醇亚硝酸酯取出后再离心，简化了前处理过程，缩短了分析时间。回收率试验结果表明，本方法准确可靠。应用本方法对36份葡萄酒样品中甜蜜素进行了检测，并对不合格葡萄酒样品进行了质谱确认。
1 材料与方法
1.1 仪器和试剂 Agilent6890N/5973N气相色谱-质谱仪(Agilen公司)，Agilent6890N气相色谱仪(Agilent公司)，带FID，配备7683自动进样器和增强型化学工作站;CENMTRIKON T-124高速冷冻离心机(Kontron公司)。正己烷(分析纯，用全玻璃蒸馏装置重蒸馏)、氯化钠(分析纯百分之650 灼烧4h)、三重蒸馏水。标准溶液配制：甜蜜素标准品(Dr.Ehrenstorfer公司)用三重蒸馏水配制成10mg/ml标准储备液。
1.2 色谱、质谱分析条件 气相色谱采用DB-1毛细管色谱柱，30 m×0.25mm×0.25um(膜厚)，分流/不分流进样口，进样口温度l5O摄氏度，脉冲不分流进样;载气：高纯氮气(纯度百分之99.999)，流速1.0ml/min;程序升温：5O摄氏度 保留0.75 min，以45摄氏度/min升至95摄氏度，保留1min，再以40摄氏度/min升至115摄氏度，保留0.5min，再以3O摄氏度/min升至145摄氏度，保留1.25 min，全部程序时间6.0min;FID温度200摄氏度，氢气：30ml/min，空气：400ml/min，补偿气：氮气，流速为35ml/min;自动进样，进样量ul 。 质谱采用EI方式：EM 电压为自动调谐值，电离能量7OeV，离子源温度230摄氏度，四极杆温度l5O摄氏度，接口温度280摄氏度;扫描方式：全扫描，扫描质量(m/z)范围：5O～300;溶剂延迟时间为2.6min。采用HP-5MS毛细管色谱柱，30 m×0.25 mm×0.25um(膜厚)，分流/不分流进样El，进样El温度200摄氏度，脉冲不分流进样;载气：高纯氦气(纯度百分之99.999)，流速1.0ml/min;程序升温：60摄氏度 保留lmin，以1O摄氏度/min升至100摄氏度，再以40摄氏度/min升至180摄氏度，全部程序时间7.0min;自动进样，进样量ul。
1.3 标准曲线的制作 分别准确吸取10ms/ml甜蜜素标准储备液0.02、0.1、0.5、1.0、2.0、5.0 ml于100 ml具塞聚乙烯离心管，加水至2Oml，置冰浴中，然后按1.4自“加入5ml 5Og/L亚硝酸钠溶液”起操作。当葡萄酒取样量为2O.0 g时，分别相当于0.O1、0.05、0.25、0.50、1.00、2.5Og/kg。以甜蜜素的浓度为横坐标(x)，相对应的峰面积为纵坐标(Y)得出回归方程：Y为7432.1 X-3O.8，r为0.99987。
1.4 样品处理 准确称取20.0 g去除酒精的葡萄酒样品于100 ml具塞聚乙烯离心管，置冰浴中，加入5ml 5Og/L亚硝酸钠溶液，5ml 100g/L硫酸溶液，摇匀，在冰浴中放置30min，并经常摇动，然后准确加入10ml正己烷，5g氯化钠，振摇8O次，然后4000 r/min离心10min，用吸管取出上层正己烷供气相色谱分析。
2 结果和讨论
2.1 样品处理方法的改进 GB/T5009.97-2003中的样品处理方法为：准确称取20.0 g去除酒精的葡萄酒样品于100ml带塞比色管中，置冰浴中，加入5ml 5Og/L亚硝酸钠溶液，5 ml 100s/L硫酸溶液，摇匀，在冰浴中放置30min，并经常摇动，然后准确加入10ml正己烷，5g氯化钠，振摇8O次，待静置分层后吸出上层正己烷于10ml带塞离心管中进行离心分离，上层正己烷供气相色谱分析。在实际测定中，由于样品处理过程中产生大量的泡沫，静置后易形成乳化，无法分层，很难吸出上层正己烷。本文采用1.4样品前处理方法，简化了操作步骤，缩短了样品前处理的时间，同时解决了乳化不分层的难题。
2.2 实验中注意事项 样品处理过程中，加入5 ml 50g/L亚硝酸钠溶液，5ml 100g/L硫酸溶液，摇匀，应注意开始振摇时应缓慢，并不时打开离心瓶盖放气，以免离心瓶盖被冲开，液体飞溅，造成人身损害及实验事故。
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