保存人类血清时应注意这些要点

人类血清是血浆中不含纤维蛋白原的胶状液体，具有维持血液的正常粘度、酸碱度、渗透压等作用。它主要由水和各种化学成分组成，这些化学成分包括白蛋白、α1、α2、β、γ-球蛋白，甘油三酯，总胆固醇，谷丙转氨酶等。血清中含有各种血浆蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生长因子、无机物等，这些物质对促进细胞生长或抑制生长活性是达到生理平衡的。　　人类血清来源于非免疫的鼠宿主，经过脂质萃取PBS溶液透析，改善其透明度。推荐用PBS将封闭血清原液稀释5-20倍，配成5%-20%的工作液，直接滴加在组织切片或者细胞涂片上，37℃度孵育10-30分钟，清除血清，勿洗，滴加适当比例稀释的一抗工作液，37℃孵育1-2h或4℃过夜。注意：封闭用血清中不能含有目标蛋白，且与一抗来源不同，可用与二抗相同来源的封闭血清。　　人类血清的保存应该注意以下几点：　　1、需要长期保存的血清必须储存于-20℃-70℃低温冰箱中，4℃冰箱中保存时间切勿超过1个月。由于结冰时体积会增加约10%，因此，在冻入低温冰箱前，必须预留一定体积空间，否则易发生污染或玻璃瓶冻裂。　　2、热灭活是指56℃，30分钟加热已解冻的血清。加热过程中须规则摇晃均匀，此热处理的目的是使血清中的补体成分(complement)灭活。除非必须，一般不建议作此热处理，因为热处理会造成沉淀物增多，而且还会影响质量。补体参与反应有：细胞毒作用，平滑肌细胞收缩，肥大细胞和血小板释放组胺，增强吞噬作用，促进淋巴细胞和巨噬细胞发生化学趋化和活化。　　3、瓶装血清解冻需采用逐步解冻法：-20℃至-70℃低温冰箱中的放入4℃冰箱中溶解1天.然后移入室温，待全部溶解后再分装。在溶解过程中需不断轻轻摇晃均匀(小心勿造成气泡)，使温度与成分均一，减少沉淀的发生.切勿直接将其从-20℃进入37℃解冻，这样因温度改变太大，容易造成蛋白质凝集而出现沉淀。